蒽醌為游離蒽醌、結(jié)合蒽醌、蒽酮、鞣質(zhì)、糖等蒽醌 類化合物的總稱。常見的蒽醌類化合物母核上通常有酚羥基 助色基團(tuán),絕大多數(shù)蒽醌化合物均為有色晶體,顏色深淺與 取代的助色基團(tuán)有關(guān),助色基團(tuán)越多,顏色越深。顏色呈現(xiàn) 為黃、橙、棕紅色和紫紅色等。故以前的蒽醌類化合物絕大 部分用于染料方面 [1]。蒽醌類化合物是天然醌類化合物中數(shù) 量多也是重要的一類化合物 [2],在自然界植物中分布很 廣 [3],主要分布于百合科的蘆薈,豆科的決明子 [4]、番瀉葉, 茜草科的茜草、鼠李,廖科的大黃、何首烏等 [5]。此外,還 存在于低等植物的代謝產(chǎn)物中。蘆薈屬多年生常綠肉質(zhì)植物, 含有豐富的蒽醌類化合物,如蘆薈大黃素、蘆薈大黃素苷, 均為蘆薈中主要活性成分,用途十分廣泛。隨著研究的深入, 蘆薈抗菌消炎、健胃、減肥等功效逐漸顯現(xiàn) [6],這與蘆薈中 含有的總蒽醌成分具有抗氧化、抗衰老、促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)等作 用有關(guān)。但蒽醌類成分的攝入亦會引發(fā)如消化系統(tǒng)、泌尿系 統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)的損害等一系列不良反 應(yīng) [7-8],這與總蒽醌的含量高低有關(guān)。市售的保健食品蘆薈 軟膠囊深受消費(fèi)者喜愛,總蒽醌則是蘆薈軟膠囊中的主要有 效成分,其含量必須控制在安全食用范圍內(nèi),才可保證蘆薈 軟膠囊的食用安全性及質(zhì)量,故對蘆薈中總蒽醌含量的研究 逐漸受到國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。本研究建立總蒽醌的含量測定方法,采用紫外分光光度法測定蘆薈軟膠囊中總蒽醌的含量, 旨在通過測定蘆薈軟膠囊中總蒽醌的含量,反映其有效成分 的含量,獲得良好的分析結(jié)果?,F(xiàn)報道如下。 1 材料與方法 1.1..儀器與試藥 1.1.1..儀器:UV1800PC紫外可見分光光度計(jì); ME55 電子天平。 1.1.2..試藥:1,8- 二羥基蒽醌標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制 品檢定所提供);甲醇、過氧化氫(30%)、鹽酸、醋酸鎂 試劑均為分析純。 1.2..方法 1.2.1..標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:精密稱取 1,8- 二羥基蒽醌標(biāo)準(zhǔn) 品10.00mg,用醋酸鎂—甲醇溶解定容至25mL,其中醋酸鎂— 甲醇溶液濃度為 0.5g/100mL。 1.2.2..標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:大吸收波長的確定:用紫 外分光光度計(jì)在300~600nm下掃描,樣品及標(biāo)準(zhǔn)品均在. 510nm 處有大吸收波長,故確定 510nm 為大吸收波長, 這與文獻(xiàn)報道一致。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:用移液管吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液,加入 醋酸鎂—甲醇溶液,稀釋配制成濃度為20、40、80、100、 150、200μg/mL 的標(biāo)液。以對應(yīng)的醋酸鎂—甲醇溶液為空白 對照,分別測定 510nm 波長處的吸光度。以濃度為縱坐標(biāo), 吸光度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 1.2.3..樣品的處理:取樣品 1g,精密稱定,置于 150mL回流瓶中,加入 50mL 甲醇,90℃水浴回流 1h,冷卻至室溫 后轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶,并用甲醇定容到刻度。過濾棄去 初濾液,取 10mL 濾液,加入到 150mL 回流瓶,水浴蒸干, 加入 20mL 水溶解,加入 3.0mL.30% 過氧化氫,0.50mL 鹽 酸 / 水(1:1),90℃水浴回流 30min,冷卻至室溫,轉(zhuǎn)移至 125mL 分液漏斗中,加入20mL 提取 2 ~ 3 次,10mL 水 洗 2 次(棄水液),取醚層揮干,殘?jiān)哟姿徭V—甲醇液溶 解定容到 100mL。測定 510nm 波長處的吸光度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線 上讀出樣品溶液中總蒽醌的含量,計(jì)算,即得。 2 結(jié) 果 2.檢測波長的選擇及標(biāo)準(zhǔn)曲線線性的繪制..紫 外掃描結(jié)果顯示,總蒽醌在510nm.處的吸收值大,即 510nm 為總蒽醌的特征吸收峰值,確定檢測波長為 510nm。 以總蒽醌濃度和吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程: y = 204.24x+0.1182,R2 = 0.9995, 提 示 總 蒽 醌 濃 度 在 20 ~ 200μg/mL 范圍內(nèi),總蒽醌的濃度與吸光度之間具有良 好的線性關(guān)系。
2.2..穩(wěn)定性試驗(yàn)..取樣品 1g,精密稱定,按照樣品的處 理方法制備樣品溶液。每隔 30min 精密吸取樣品溶液 3mL, 測定其吸光度,共測定 3h。結(jié)果顯示,樣品溶液顯色后,在 3h 內(nèi)穩(wěn)定,其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD 為 0.37%,穩(wěn)定性良好。 2.3..精密度試驗(yàn)..取樣品 1g,精密稱定,按照樣品的處 理方法制備。精密吸取樣品品溶液 3mL,樣品平行測定 6 次。 其 RSD 為 0.56%,提示該方法精密度良好。 2.4..重復(fù)性試驗(yàn)..取6份同批次樣品1g,精密稱定, 按照樣品的處理方法制備制備6份樣品溶液。分別精密 吸取6份供試品溶液3mL,依法測定。計(jì)算平均含量為 37.85mg/100g,RSD 為 0.42%,提示該方法重復(fù)性較好。 2.5..回收率試驗(yàn)..稱取已知含量樣品 1g,精密稱定,進(jìn) 行 3 個水平的加標(biāo)試驗(yàn),每個水平做 3 次平行試驗(yàn),按 1.2.3 中方法處理,分別測定其總蒽醌含量。結(jié)果顯示,回收率為 95.00% ~ 102.50%,平均回收率為 99.17%,RSD 為 2.27%。 可滿足分析研究的需要,對蘆薈軟膠囊中總蒽醌提取有很好 的適用性。見表 1。
2.6..樣品測定..取6批蘆薈軟膠囊樣品,分別進(jìn)行測 定其總蒽醌含量。結(jié)果顯示,蘆薈軟膠囊中總蒽醌含量在 0.34 ~ 0.41mg/g 范圍內(nèi),其 RSD 范圍 0.95% ~ 2.03%,對蘆 薈軟膠囊中總蒽醌測定有良好的適用性。
3 討 論 本研究采用紫外分光光度法測定蘆薈軟膠囊中總蒽醌的 含量,總蒽醌在 20 ~ 200μg/mL(R2=0.9995) 范圍內(nèi)呈良好的 線性關(guān)系,平均回收率為 99.17%,RSD 為 2.27%。應(yīng)用于檢 測實(shí)際樣品,其 RSD 范圍 0.95% ~ 2.03%,檢測條件穩(wěn)定, 加標(biāo)回收率高,變異系數(shù)較小,其精密度和重復(fù)性均較好, 且樣品前處理簡單,便于操作,成本低廉,故此方法可用于 檢測蘆薈軟膠囊中總蒽醌的含量,為1種理想的含量測定方法, 為蘆薈軟膠囊的生產(chǎn)提供可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和科學(xué)依據(jù)。同時 利于加強(qiáng)蘆薈軟膠囊保健品的質(zhì)量安全監(jiān)督。值得推廣應(yīng)用。
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