紫外可見分光光度計的主要組成部分
不論光度計(Photometer)、比色計(Colorimeter)還是分光光度計(Spectrophotometer),其基本結(jié)構(gòu)原理都是相似的,都由光源、單色光器、狹縫、吸收杯和檢測器系統(tǒng)等部分組成。
(一)光源
一個良好的光源要求具備發(fā)光強度高、光亮穩(wěn)定、光譜范圍廣和使用壽命長等特點。幾乎所有的光度計都采用穩(wěn)壓調(diào)控的鎢燈(Tungsten Lamp)。它適用于做340-900nm范圍的光源。更先進的分光光度計外加有穩(wěn)壓調(diào)控的氘燈(Hydrogen Lamp)。它適用于做200 -360nm的紫外分光分析的光源。
(二)單色光器
分光光度法測定某一物質(zhì)的吸光度需要在某一特定波長下進行。單色光器的作用在于根據(jù)需要選擇一定波長范圍的單色光。在實際工作中欲選擇出單個某波長的光線是困難的。所謂單色光是指在此波長有zui大發(fā)射,而在相鄰較長和較短波長范圍內(nèi)的發(fā)射能量較少而言。單色光的波長范圍愈窄,儀器的敏感度愈高,測量的結(jié)果愈可靠。
zui簡單的單色光器是光電比色計上所采用的濾光片(一定顏色的玻璃片)。由于通過光線的光譜范圍較寬,所以光電比色計的分辨效果較差,但對比色分析還是可以得到較為滿意的效果的。棱鏡(Prism)的衍射光柵(Diffraction Grating)是較好的單色光器。它們能在較寬光譜范圍內(nèi)分離出相對單一波長的光線(圖2-4)。
(三)狹縫
通過單色光器的發(fā)射光的強度可能過強也可能過弱不利于進一步檢測。狹縫是由一對隔板在光通路上形成的狹縫。通過調(diào)節(jié)狹縫的大小來調(diào)節(jié)入射單色光強度并使入射光形成平行光線,以適應(yīng)檢測器的需要。光電比色計的狹縫是固定的,而光度計和分光光度計的狹縫大小是可調(diào)的。
(四)吸收杯
吸收杯又叫樣品杯(Sample Cell),是光度測量系統(tǒng)的zui重要部分之一。在可見光范圍內(nèi)測量時選用光學(xué)玻璃吸收杯,在紫外線范圍內(nèi)測量時要選用石英吸收杯。注意保護吸收杯的質(zhì)量是取得好的分析結(jié)果的重要條件之一。不得用粗糙、堅硬物質(zhì)接觸吸收杯,不能用手指握取吸收杯的光學(xué)面;用后要用水及時沖洗,不得殘留測定液,尤其是蛋白質(zhì)和核酸溶液。
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